該片根據1995年震驚北京的375路公交車失蹤事件改編，通過深夜公車的莫名失蹤以及隨即發現的三具無名尸體展開，故事環環相扣引人無限遐想。那一年，從圓明園出發的375路公交車離奇失蹤，隔天在找到這輛公交車時，一系列奇特現象讓人驚悚，至今這個案件還未得到破解。
戲中女主人公沈菲菲和男友深夜吵架，氣憤的她收拾行李準備出走，被憤怒沖昏頭腦的沈菲菲不由自主上了一輛黑色巴士。巴士上，司機面色冷漠，乘客形態各異，在他們的注視下，沈菲菲渾身冰冷地走到最后一排坐下。 巴士開動，“午夜伊甸園”，“寂寞山谷”，“黑色沼澤”“永眠之地”……每一個站點都有人離奇死亡，且死前都發生了驚人的變化，有的化身殺人狂魔，有的自怨自艾，有的瘋狂掙扎…… 每個乘客瘋狂的改變讓沈菲菲毛骨悚然，沈菲菲感到，從踏入巴士的那一刻就已經走上了一條不歸之路。 乘客們為何會離奇死亡？巴士司機為何漠視乘客生死？沈菲菲又會有怎樣的命撸�9月，敬請期待《午夜巴士》，沒有最恐怖，只有更恐懼！